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    離心機分離實例一

    2009-05-18 [2720]

        豬腎中微粒體膜組分粗品的分離

          儀器與試劑

          1.超速離心機(冷凍離心機)和轉頭

          2.勻漿緩沖液。50m mol/L Hepes/NaOH (pH7.4),0.33mol/L蔗糖。

           3.重懸緩沖液。10m mol/L Hepes/NaOH (pH7.4)。

          方法

           1.使用韋林攪拌器(要求4℃預冷)在10倍體積(1L)的勻漿緩沖液(要求4℃預冷),中破碎100g豬腎皮質。

            2.將勻漿物在離心機中于8000×g離心15min;

             3.小心地轉移出上清液,并將其在26000×g離心2min;

              4.用重懸緩沖液(要求4℃預冷)重懸離心得到的微體沉淀至蛋白質終濃度約為10mg/ml。這樣得到的微粒體沉淀重懸物就是膜結合蛋白質的來源

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